ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ — ЭОЗИНОМ
Окраска гематоксилин-эозином — наиболее распространённый метод окрашивания срезов. Этот методпозволяет установить отношения между частями органа, отлично выявляя все клеточные элементы и некоторые неклеточные структуры. Практически во всех случаях независимо от поставленной задачи применяется окраска гематоксилин-эозином. В большинстве случаев для изучения структуры нормального или измененного в результате болезни органа ограничиваются этим методом окраски. В других случаях, когда перед исследователем стоит специальная задача, пользуются особыми методами, окрашивая в то же время параллельно ряд срезов гематоксилин-эозином.
Эта окраска является двойной: гематоксилин — основной краситель — окрашивает ядра клеток, эозин — кислый краситель — красит протоплазму клеток и в меньшей степени — различные неклеточные структуры.
Гематоксилин представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке. Эозин — искусственная краска. Растворы красителей должны быть приготовлены заранее. Гематоксилин сам по себе не является красящим веществом. Для того чтобы приготовить краску, гематоксилин подвергают окислению, в результате чего он превращается в красящее вещество — гематеин. В соединении с некоторыми солями гематеин дает четкое окрашивание ядер (используют гематоксилин Эрлиха, Майера, железный гематоксилин Гейденгайна).
Эозин — протоплазматический краситель; используется он в виде спиртовых или, гораздо чаще, водных растворов. Для приготовления эозина 0,1 г краски растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Подготовка срезов к окраске заключается в их кратковременной обработке спиртом. Поскольку при заливке в парафин или целлоидин материал обезвоживается в спиртах, срезы, полученные при этих способах заливки, в особой подготовке для окраски гематоксилин-эозином не нуждаются. Обрабатывать необходимо замороженные срезы. При этом происходит их обезжиривание и другие изменения в структуре, что значительно улучшает окрашивание гематоксилин-эозином. Срезы обрабатывают в 96° спирте не более 3-5 минут. Из спирта срезы переносят обратно в дистиллированную воду. Окраску производят сначала гематоксилином.
Порядок проведения окраски:
| Дистиллированная вода | ополоснуть |
| Раствор гематоксилина | 1-20 мин |
| Солянокислый спирт | дифференцировка |
| Аммиачная вода | срезы синеют (контроль под микроскопом) |
| Проточная вода | 5-10 мин |
| Дистиллированная вода | ополоснуть |
| Раствор эозина | 10с-3 мин |
| Спирт 96%, карбол-ксилол, заключение |
Результат: ядра синие, цитоплазма и межклеточное вещество розовые.
Примеры практических микропрепаратов, окрашенных гематоксилином-эозином:
|
Рис. 1, 2. Болезнь Фара (феррокальциноз). В веществе головного мозга из зоны подкорковых ядер зональное обызвествление (практически без признаков склероза) стенок небольших сосудов (капилляров, мелких артерий и артериол) различной степени выраженности (от пылевидного включения солей кальция в толще стенки до полного замещения сосудистых стенок кальцинатами). Вдоль стенок большинства капилляров густо расположены небольшие округло-овальные кальцинаты по типу псаммом, вокруг отдельных капилляров образованы целые муфты петрификатов. |
|||||
|
Рис. 3, 4. Болезнь Фара (феррокальциноз, другое наблюдение). Крупные группы густо расположенных мелких сосудов с наличием циркулярного пылевидного и в виде мелких гранул кальциноза стенок, расположенного между адвентицией сосудов и средней их оболочкой, в толще средней оболочки, полностью замещающего сосудистую стенку. Видны фрагменты сосудистых стенок в косопоперечном, продольном срезе, утолщенные кальцифицированные стенки выглядят как «кусочки вермишели». |
|||||
|
Рис. 5. Очаговый интрамуральный кардиосклероз. Сохранившиеся кардиомиоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, выраженной гипертрофии. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
Рис. 6. Умеренная-выраженная гипертрофия кардиомиоцитов, белковая зернистая их дистрофия. В цитоплазме ряда кардиомиоцитов вокруг ядер расположены мелкие скопления золотисто-жёлтого «пигмента старения» липофусцина. Очаговая круглоклеточная инфильтрация стромы. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
||||
|
Рис. 7, 8. Грибковый перикардит (острый гнойно-фибринозный), группа гиалогифомикозов. Очаги выраженной лейкоцитарной инфильтрации с включениями относительно рыхлого фибрина на фоне очагово-диффузных диапедезно-деструктивных кровоизлияний расположены в эпикарде и субэпикардиальной жировой ткани. Здесь же расположены колонии грибковой микрофлоры, относящейся к гиалогифомикозам: хорошо окрашены гематоксилином-эозином, гифы в диаметре около 2-3 мкм, разрастаются пучками от центрального фокуса в виде «кустарника». Некоторые гифы дихотомично делятся. Мицелий септированный. |
|||||
|
Рис. 9, 10. Метастазы плоскоклеточного рака в миокард, субэпикардиальную жировую ткань. Увеличение х250. |
|||||
|
Рис. 11. Актиномикоз лёгкого с перифокальной картиной очаговой острой гнойной пневмонии. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100. |
Рис. 12. Лёгочная миграция личинки аскариды. В просвете альвеолы червеобразная структура розового цвета, свёрнутая в клубок, с признаками её движения (тонкие перифокальные полоски просветления в реактивном гнойном экссудате). Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
||||
|
Рис. 13-15. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания древовидного мицелия с перифокальной острой гнойно-фибринозной пневмонией. В отдельных полях зрения видны спорангии со спорами. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. Препараты предоставлены кафедрой судебной медицины Ижевской ГМА, Свердловским ОБСМЭ. |
|||||
|
Рис. 16, 17. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания мицелия с большим количеством спороносцев. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100 и х250. |
|||||
|
Рис. 18. Криптококкоз лёгкого. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100. |
Рис. 19. Криптококкоз печени. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
||||
|
Рис. 20, 21. Печень. Очаговое острое гнойное межуточное воспаление с преобладанием эозинофилов. Очаговое выраженное полнокровие синусоидных капилляров и центральных вен с эритростазами, диапедезными микрогеморрагиями. Гепатоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, мелко — и крупнокапельной жировой дистрофии. Часть печёночных клеток в состоянии некробиоза-некроза. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
|||||
|
Рис. 22. Выраженная очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов, сочетающаяся с мелко — и крупнокапельной жировой дистрофией печёночных клеток. Окраска: гематоксилин-эозин. | |||||
Гистологический образец лёгочной ткани человека, окрашенный гематоксилин-эозином.
Окраска гематоксилином и эозином (окраска гематоксилин-эозином) - один из самых распространённых методов окраски в гистологии . Широко используется в медицинской диагностике, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии .
Окраска включает использование основного красителя гематоксилина , окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y , окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро , рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы . Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки , например, тельца Леви . Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.
Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином, остаются неокрашенными: адипоциты , миелиновая оболочка аксонов нейронов , мембрана аппарата Гольджи и др.
Wikimedia Foundation . 2010 .
Гистологический образец лёгочной ткани человека, окрашенный гематоксилин эозином. Окраска гематоксилин эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской… … Википедия
Туберкулез органов дыхания. Органы дыхания при туберкулезе (Туберкулёз органов дыхания) поражаются наиболее часто. В соответствии с принятой в нашей стране клинической классификацией туберкулеза различают следующие формы Т. о. д.: первичный… … Медицинская энциклопедия
I Сердце Сердце (лат. соr, греч. cardia) полый фиброзно мышечный орган, который, функционируя как насос, обеспечивает движение крови а системе кровообращения. Анатомия Сердце находится в переднем средостении (Средостение) в Перикарде между… … Медицинская энциклопедия
- (leucoscs; греч. leukos белый + ōsis; синоним лейкемия) заболевания опухолевой природы, протекающие с вытеснением нормальных ростков кроветворения: опухоль возникает из кроветворных клеток костного мозга. Заболеваемость Л. неодинакова в различных … Медицинская энциклопедия
I Пневмония (pneumonia; греч. pneumon легкое) инфекционное воспаление легочной ткани, поражающее все структуры легких с обязательным вовлечением альвеол. Неинфекционные воспалительные процессы в легочной ткани, возникающие под влиянием вредных… … Медицинская энциклопедия
Туберкулез внелегочный условное понятие, объединяющее формы туберкулеза любой локализации, кроме легких и других органов дыхания. В соответствии с клинической классификацией туберкулеза (Туберкулёз), принятой в нашей стране, к Т. в. относят… … Медицинская энциклопедия
I Плацента (лат. placenta лепешка; синоним детское место) развивающийся в полости матки во время беременности орган, осуществляющий связь между организмом матери и плодом. В плаценте происходят сложные биологические процессы, обеспечивающие… … Медицинская энциклопедия
I Забрюшинное пространство (spatium retroperitoneale; синоним ретроперитонеальное пространство) клетчаточное пространство, расположенное между задней частью париетальной брюшины и внутрибрюшной фасцией; простирается от диафрагмы до малого таза. В … Медицинская энциклопедия
I Матка Матка (uterus, metra) непарный мышечный полый орган, в котором происходят имплантация и развитие зародыша; расположен в полости малого таза женщины. Органогенез Развитие М. во внутриутробном периоде начинается при длине плода около 65 мм … Медицинская энциклопедия
I Мокрота (sputum) выделяемый при отхаркивании патологически измененный трахеобронхиальный секрет с примесью слюны и секрета слизистой оболочки носа и придаточных (околоносовых) пазух. В норме трахеобронхиальный секрет состоит из слизи,… … Медицинская энциклопедия
Методика заливки в желатин.
Метод пригоден для эмбриологических. исследований, заливки рыхлых тканей и органов (не вызывает сморщивания), при исследованиях с целью выявления жиров и липоидов. Режут желатиновый блок только на замораживающем микротоме.
Для заливки приготавливают два раствора:
а) 25% раствор: 25 г размельченной или порошкообразной желатины растворяют в водяной бане (при 37°) в 75 мл 1 % карболовой воды (во избежание испарения сосуд должен быть закрыт);
б) 12,5% раствор: 1 часть густого раствора разбавляют 1 частью теплой 1% карболовой воды. Для приготовления последней в 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г карболовой кислоты при постоянном взбалтывании.
Приготовленные растворы желатины разливают в отдельные пробирки или другие небольшие сосуды порциями,
Для его приготовления 2,0 г гематоксилина растворяют в 100 мл 96% спирта и к полученному раствору добавляют 100 мл дистиллированной воды, 100 мл глицерина, 3,0 г калийных квасцов и 10 мл ледяной уксусной кислоты. Все ингредиенты нужно добавлять в указанной последовательности. Полученный раствор необходимо поставить на свету и при доступе воздуха не менее чем на 15 дней с тем, чтобы гематоксилин успел окислиться в гематеин, который и является красящим веществом. Банку с раствором при этом накрывают бумажным колпачком или сложенной в несколько раз марлей. Гематоксилин Эрлиха окрашивает ядра в синий цвет. Для окраски цитоплазмы используют 1% водный раствор эозина.
Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Замороженные срезы перед окрашиванием следует обезжирить, поместив их на 20-30 мин или на ночь в 96% спирт. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.
Порядок окрашивания срезов гематоксилин-эозином следующий :
1) срезы переносят в дистиллированную воду;
2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2-5 мин;
3) промывают в дистиллированной воде;
4) затем промывают в водопроводной воде 3-5 мин;
5) осуществляют контроль под микроскопом;
6) дифференцируют 1% раствором хлористоводородной кислоты в 70° спирте 1-2 с;
7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей;
8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом);
9) промывают в дистиллированной воде;
10) 1% водный раствор эозина 0,5-1 мин;
11) промывают в дистиллированной воде (и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза;
12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам. В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2-3 срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково. Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.
1. Парафиновые или замороженные срезы доводят до воды.
2. Окраска гематоксилином - в течении 3-5 минут.
3. Промывка в воде - 2 минуты.
4. Дифференцировка в спирте, подкисленном соляной кислотой (1% раствор соляной кислоты в 70% спирте), несколько секунд с последующим восстановлением подщелоченной водой (около 1 минуты). Этот этап желателен, но не обязателен.
5. Промывка в проточной воде.
6. Ополаскивание дистиллированной водой.
7. Окраска 1% эозином - 1-2 минуты.
8. Ополаскивание дистиллированной водой.
9. Обезвоживание в спирте - 2 мин.
10. Просветление в ксилоле - 2 мин
11. Заключение среза - капля бальзама, покровное стекло.
Методы исследования в гистологии включают приготовление гистологических препаратов и их изучение с помощью микроскопа.
Основным методом гистологического исследования является световая микроскопия, разновидностями которой являются:
- фазово-контрастная микроскопия - основана на смещении фаз световых волн при прохождении лучей через разные по плотности структуры изучаемого объекта, что приводит к повышению контрастности этих структур и позволяет рассматривать неокрашенные и живые клетки;
- интерференционная микроскопия - основана на разном ходе световых лучей, дающих такое изображение объекта, по которому можно судить о концентрации различных веществ в клетке;
- поляризационная микроскопия - основана на двойном лучепреломлении клеточных структур, что позволяет изучать спиральные или не видимые при других методах исследования структуры (например, миофибриллы);
- люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия - основана на явлении свечения некоторых веществ при действии на них коротковолновых лучей, что даёт возможность исследовать содержание в клетках нуклеиновых кислот, некоторых белков, при этом препараты предварительно окрашивают специальными красителями - флюорохромами;
- ультрафиолетовая микроскопия - основана на использовании ультрафиолетовой части спектра для просвечивания объекта.
Для изучения тонкого внутреннего строения клеток и межклеточных структур (ультраструктур) используют электронную микроскопию.
Для выявления в клетках различных химических соединений (аминокислот, белков, жиров, углеводов, минеральных веществ и т.д.) используют гистохимические методы исследования, основанные на использовании красителей, которые избирательно связываются только с теми химическими соединениями клетки, которые необходимо изучить, и окрашивают их, делая видимыми.
Метод радиоавтографии, основанный на введении в клетку изотопов, которые включаются в соответствующие структуры (например, меченый тимидин встраивается в ядра клеток, синтезирующих ДНК), используется для изучения течения синтетических процессов в тканях.
Для изучения механизмов пролиферации и дифференцировки клеток, их реакции на различные воздействия используют метод культуры клеток и тканей, который основан на выращивании вне организма в искусственных питательных средах различных клеток.
Одним из современных методов, используемых в гистологии, является конфокальная микроскопия, которая позволяет получать трёхмерное изображение исследуемого объекта с помощью специальных компьютерных программ.
Орсеин
Эта гистологическая окраска используется для выявления эластиновых волокон, особенно это актуально в патологической анатомии кровеносных сосудов. Этот краситель добывается из нескольких видов лишайников. На снимке ниже представлены эластиновые мембраны аорты - самого крупного сосуда тела человека, функция которого заключается смягчить, мощную «ударную волну» сердечного сокращения и провести поток крови к более мелким ветвям. Аорта относится к сосудам эластического типа, так как в ее стенке содержится множество таких эластиновых мембран, куда больше чем в артериях других типов.
Автор фотографии: уточняется
Источник: University of Tasmania. School of Medicine secure.health.utas.edu.au
Осмия тетрооксид (Оксид осмия(VIII))
Другая окраска на жироподобные вещества, хотя сейчас, чаще используется как фиксатор для приготовления препаратов для электронной микроскопии. Он связывает ненасыщенные липиды (в области двойных связей) и, таким образом ткани с большим количеством полиненасыщенных жиров окрасятся в черный цвет. На снимке ниже - отличный пример поперечный срез нервного волокна. Черные кружки - отдельные аксоны с их оболочкой, которая богата миелином - веществом, являющегося своего рода изолятором для нервного волокна, и способствующего распространению нервного импульса, а также очень охотно связывающим высший оксид осмия.
Автор фотографии: уточняется
Источник:vetmed.vt.edu
Изображение изстатьиHistopathologic Changes in Growth-Plate Cartilage Following Ischemic Necrosis of the Capital Femoral Epiphysis An Experimental Investigation in Immature Pigs
. Harry K.W. Kim
, MD, FRCS(C); Phi-Huynh Su
, BSc; Yu-Shan Qiu
, MD
,
опубликованной в
J Bone Joint Surg Am
, 2001 May;83(5):688-697
Источник:jbjs.org
Окраска по Фон Косса (von Kossa)
Эта окраска используется для исследования степени минерализации ткани, то есть выявления выпавших в ткани нерастворимых фосфатов. Принцип окраски заключается в преципитации ионов серебра в кислой среде. Фотохимический распад образующихся фосфатов серебра до металлического серебра, происходящий под воздействием света (процесс, по своей сути, аналогичен таковому происходящему при печати фотографий) позволяет выявить наличие в ткани фосфатов, (чаще всего именно фосфатов кальция), но окраска выявляет лишь присутствие фосфатов, а не кальция самого по себе. Для выявления солей кальция требуются другие окраски, например, уже описанный, ализарин красный. Цветовая схема при этой окраске следующая: фосфаты кальция в массивных депозитах - черного цвета, в мелкодисперсных отложениях - серого. Клеточные ядра - красные, а цитоплазма клеток - светло-розового цвета.
Автор фотографии: уточняется
Источник:iupui.edu
Окраска берлинской лазурью
Она же железная лазурь, прусский синий, парижская лазурь, прусская лазурь, гамбургская синь, нейблау, в гистологии же известна как реакция Перлса. Этот метод очень распространен в гистологии для выявления в тканях соединений железа (например, при диагностике гемохроматозов и выявления гемосидероза - состояний при которых в тканях, по тем или иным причинам, накапливается избыток соединений железа, что, в конечном счете, приводит к недостаточности внутренних органов). Но, что интересно, здесь используется не готовый пигмент для окраски, а образование пигмента в этом случае, происходит непосредственно в срезе ткани и его образование, связанное с присутствием соединений железа, расценивается как положительная реакция.
Оригинальная методика окраски, описанная в 1867 году как «берлинская лазурь Перлса» названа в честь ее автора - германского патолога Макса Перлса (Max Perls) (1843-1881), использовавшего растворы гексацианоферрата (II) калия и соляной кислоты. Депозиты соединений железа в тканях под действием этих растворов образуют собственно берлинскую лазурь, гранулы которой, цвета разных оттенков синего, видны в препарате под микроскопом.
Макрофаги нагруженные железосодержащим пигментом гемосидерином в печени мыши. Селезенка является своего рода "кладбищем для эритроцитов" здесь эритроциты отслужившие свой век (это около 120 дней) задерживаются и разрушаются, а из пигмента гемоглобина извлекается "железо" и используется для синтеза новых молекул кислородсвязывающего белка - гемоглобина.
Автор фотографии: уточняется
Источник: iupui.edu
Срез ткани легкого со скоплениями макрофагов нагруженных гемосидерином. Такие скопления появляются при хронической "застойной" левожелудочковой сердечной недостаточности, когда в системе легочной артерии поднимается давление, из-за того что сердце не может "перекачать" кровь из малого в большой круг кровобращения. Когда давление в ветвях легочной артерии повышено, в полоси альвеол так или иначе начинают проникать эритроциты, они фагоцитируются альвеолярными макрофагами в цитоплазме которых, со временем, накапливается бурый железосодержащий пигмент - гемосидерин, когда таких клеток становится достаточно много (при прогрессирующей сердечной недосточности) они начинают выделятся с мокротой, которая приобретает ржавый оттенок, в такой мокроте при микроскопии можно выявить эти альвеолярные макрофаги, наполненные гемосидерином, их иногда называют клетками сердечных пороков, так как такая степень сердечной недостаточности особенно часто наблюдается при пороках сердца, хотя они также встречаются и при легочных кровотечениях и инфарктах легкого.
Автор фотографии: Yale Rosen
Источник: flickr.com/photos/pulmonary_pathology
Пикросириус красный
Применяется для селективного выявления коллагена I и III типа. Окрашенные по этому методу препараты могут быть исследованы как при помощи стандартной светлопольной световой микроскопии, тогда коллагеновые волокна будут окрашены в ярко-красный цвет, на бледно-желтом фоне, а клеточные ядра, в идеале, - черного цвета, но также могут быть серые или коричневые.
Изображение из статьи “Salt Induces Myocardial and Renal Fibrosis in Normotensive and Hypertensive Rats ”. Henry C. M
. Yu
, MBChB, MRCP, FRACP, FHKCP; Louise M. Burrell
, MBChB, MD, FRACP; M. Jane Black
, BSc, PhD; Leonard L. Wu
, PhD; Rodney J. Dilley
, BSc, PhD; Mark E. Cooper
, MBBS, PhD, FRACP; Colin I. Johnston
, MBBS, FRACP
