Антитела к Treponema pallidum (Сифилис) (IgM и IgG) ИХЛ (колич.) – метод количественного хемилюминисцентного иммунноанализа для эффективной диагностики сифилиса.Относится к высокочувствительным методам диагностики сифилиса. Определяет в крови антитела классов IgM и IgG (суммарные антитела). Основные показания к применению: диагностика и подтверждение сифилиса, планирование беременности, подготовка к операции, беспорядочные половые контакты, проверка доноров.
Согласно приказу МЗ РФ от 26.03.2001 г. за №87 "О совершенстовании серологической диагностики сифилиса" последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:
Из существующих серологических методов диагностики сифилиса метод хемилюминисцентного иммуноанализа является одним из наиболее чувствительных методов. Антитела класса IgM к Treponema pallidum появляются в сыворотке крови, начиная со 2 - 4-й недели после инфицирования. В случае успешного лечения титр антител IgM снижается до неопределяемых значений. Антитела класса IgG выявляются обычно на 4-й неделе после заражения и могут сохраняться годами (или пожизненно) после выздоровления. Данный метод разработан для скрининговых исследований выявления антител к антигенам Treponema pallidum. С его помощью можно обнаружить как недавнюю, так и прошедшую инфекцию. Обнаружение суммарных антител к бледной трепонеме в пробе может указывать на недавний, прошедший сифилис и выявляться при успешно вылеченном сифилисе.
Бледная трепонема (Treponema pallidum (Трепонема паллидум)) была открыта E. Hoffman и F. Schaudin в 1905 году. Микроорганизм является возбудителем такого венерического заболевания, как сифилис. Сифилис относится к инфекциям, передающимся половым путем (ИППП). В настоящее время инфекция поддается скринингу. Скрининговая диагностика основана на обнаружении антител в крови, формирующихся иммунной системой человека на антигены возбудителя.
Микроорганизм относится к семейству Спирохет (Spirohaetacea) и роду Трепонема (Treponema). Бледная трепонема (БТ) приобрела свое название по причине слабой способности бактерии воспринимать окраску. Микроорганизм обладает спиралевидной формой. Завитки спирали расположены на одинаковом расстоянии друг от друга.
Важнейшей функцией БТ является движение, что обуславливает ее высокую инвазивность и возможность распространяться по организму человека. Трепонемы отличаются от других микроорганизмов характерными движениями - поступательное, вращательное, волнообразное, сгибательное, маятникообразное. Движения бактерии плавные, что используется как дифференциально-диагностический признак.
Трепонемы размножаются поперечным делением. Время деления составляет около 30 часов.
В тканях человека трепонема встречается в двух формах: в форме патогенного существования (спиралевидной) и устойчивых формах выживания (L-формы, цисты, полимембранные фагосомы). В устойчивые формы бактерия переходит при неблагоприятных условиях для существования (под воздействием иммунной системы, антибиотиков). Образование этих форм – не только способ сохранения возбудителя в организме в течение длительного времени, но и развития инфекции. В случае благоприятного изменения условий существования БТ приобретает возможность вновь перейти в патогенную спиралевидную форму.
Бактерия малоустойчива к внешним воздействиям. Оптимальной температурой для Трепонема паллидум является 37 градусов. Вне организма человека при температуре в 40-42 градуса трепонемы погибают в течение 3-6 часов. В крови при температуре 4 градусов БТ сохраняют свою патогенность не менее суток. Все известные антисептики в обычных концентрациях губительно действуют на бактерию.
Трепонема паллидум является возбудителем сифилиса. Симптомы заболевания различны и определяются длительностью болезни. Еще в 30-40-е годы прошлого столетия были выделены 4 периода течения заболевания:
Для первичного периода сифилиса характерен следующий клинический симптомокомплекс:
Вторичный период сифилиса характеризуется следующим комплексом клинических проявлений: пятнистый сифилид (сифилитическая розеола), сифилитическая алопеция (облысение), папулезный сифилид, папуло-пустулезный сифилид, сифилитическая лейкодерма (пигментный сифилид).
При вторичном периоде также обнаруживаются повреждения внутренних органов, которое чаще всего протекает бессимптомно или проявляется функциональными нарушениями. Специфическое поражение может развиться в любом органе, однако к наиболее часто встречающимся относят специфический гепатит, гастрит, миокардит, поражение почек и опорно-двигательного аппарата (боли в мышцах и/или костях, синовиты и др.). В этом периоде поражается и нервная система (ранний нейросифилис).
Переход инфекционного процесса в третичный период связан с отсутствием или неполноценностью лечения ранних форм сифилиса или наличием у пациента иммунодефицитного состояния. При третичном сифилисе поражения слизистых оболочек и кожи проявляются гуммозными и бугорковыми высыпаниями. Обнаруживаются повреждения внутренних органов, которые имеют совершенно другую симптоматику. Чаще всего поражается сердечно-сосудистая система, реже печень (в 4-6% случаев) и другие органы (в 1-2% случаев) - почки, желудок, легкие, кишечник, яички. И также в процесс могут вовлекаться нервная система (поздний нейросифилис) и опорно-двигательный аппарат.
Возможно формирование врожденного сифилиса, который возникает при заражении плода. Это происходит благодаря попаданию микроорганизмов через пупочную вену.
Источником сифилиса является больной человек, особенно в первые 2 года болезни, то есть самыми заразными являются пациенты с первичным и вторичным сифилисом. Пациенты же с поздними формами болезни (длительность заболевания более 3 лет) практически не заразны.
Для развития сифилиса должны выполняться два основных условия:
Пути передачи возбудителя:
Половым путем заражаются более 95% пациентов при различных вариантах половых контактов (традиционные и нетрадиционные). Пот и моча пациентов не заразны. Грудное молоко и сперма заразны даже при отсутствии симптомов заболевания в области молочных желез или половых органов.
Для подтверждения диагноза «сифилис» требуется обязательное лабораторное исследование. Все методы лабораторной диагностики инфекции условно можно разделить на:
Темнопольная микроскопия основана на феномене Тиндаля. Для выполнения исследования используются микроскопы со специальным объективом. Исследованию на Treponema pallidum подлежат все язвенные и эрозивные высыпные элементы, похожие на первичные и вторичные сифиломы. При невозможности исследования сыпи рекомендуется пунктировать увеличенный регионарный лимфатический узел. При микроскопии в темном поле должны появиться лейкоциты, эпителиальные клетки и движущиеся светящиеся частицы. БТ выглядит как тонкий нежный пунктир или тонкая спираль серебряного оттенка, которая совершает плавные движения.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет обнаружить единственную молекулу ДНК возбудителя сифилиса среди огромного числа других молекул. Метод ПЦР при хорошей подготовке образцов и правильном техническом проведении фактически не дает ложных результатов и очень оправдан для диагностики сифилиса при небольшом количестве возбудителя в исследуемом материале. Пока ПЦР является дорогостоящим методом исследования и труднодоступным.
Заражение БТ лабораторных животных как метод прямого определения возбудителя сифилиса уже давно не применяется для диагностики. Причины следующие: трудоемкость, дороговизна, необходимость содержания животных, длительность получения результата. Наиболее удобным и чувствительным лабораторным животным для заражения сифилисом является кролик. Сегодня этот метод используется только в крупных исследовательских центрах в качестве «золотого стандарта» для оценки чувствительности других тестов.
С помощью этих тестов обнаруживаются в анализе крови или в спинномозговой жидкости антитела (реагины) класса M и G (IgM и IgG) к липидам клеточной стенки бледной трепонемы. Антитела появляются приблизительно через неделю после появления первичной сифиломы в крови в достаточном количестве для определения этими тестами.
Следует напомнить: IgM (острофазовые антитела) появляются уже через 2 недели после заражения, а IgG начинают образовываться в организме пациента только спустя 4 недели от момента заражения. До этого срока антитела нельзя обнаружить.
При сифилисе истинный иммунитет не формируется. У пациентов развивается инфекционный (нестерильный) иммунитет, сохраняющийся в течение нахождения возбудителя в организме пациента. Максимальная активность иммунитета наблюдается во вторичном периоде сифилиса.
Все серологические методы диагностики сифилиса условно можно разделить на две группы.
Отборочные реакции. Используются в качестве скринингового исследования (массовое серологическое обследований людей на сифилис): лиц декретированных профессий, пациентов поликлиник и соматических стационаров, а также для экспресс-диагностики в кожно-венерологических диспансерах. Они должны быть технически просты, быстро выполнимы, чувствительны и экономически выгодны. При этом специфичность этих реакций недостаточно высока, поэтому для окончательной диагностики сифилиса они не применяются. Наиболее известными отборочными тестами являются:
- РСКк (реакция Вассермана) - реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном. Не используется на сегодняшний день.
- МРП - микрореакция преципитации инактивированной сывороткой. Широко используется в медицинской практике с 80-х годов прошлого века.
- RPR - тест быстрых плазменных реагинов. Тест основан на том же принципе, что и МРП, но выполняется с плазмой крови.
Подтверждающие (специфические) реакции. Используются для подтверждения наличия у пациента сифилиса. Также эти тесты еще называются трепонемными, потому что в их основе лежит применение антигенов трепонемного происхождения. Подтверждающими тестами являются:
- Иммуноблотинг (Western Blot).
- ИФА (ELISA) - иммуноферментный анализ.
- РПГА (TPHA) - реакция пассивной гемагглютинации.
- РИФ (FTA) - реакция иммунофлюоресценции;
- РИБТ (TPI) - реакция иммобилизации бледных трепонем.
- РСКт (реакция Вассермана) - реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном.
От использования реакций Вассермана (RW) давно отказались. Основными недостатками реакции является необходимость предварительной подготовки исходных реагентов и исследуемых сывороток, сложность постановки реакции, а также низкая чувствительность реакции, наличие ложноположительных результатов. В целом реагенты и саму реакцию сложно стандартизировать.
На сегодняшний день часто используют для определения антител 3 метода - ИФА, РИФ и РПГА, являющиеся высокочувствительными. Их оценивают от 2+ до 4+. Эти методы становятся положительными уже к концу инкубационного периода (приблизительно за неделю до появления первичной сифиломы). ИФА и РПГА могут использоваться в качестве скрининговых тестов в случае применения неспецифического антигена.
Общая информация об исследовании
Анализ проводится в целях обнаружения Treponema pallidum (бледной трепонемы) – бактерии, которая вызывает сифилис – хроническое венерическое инфекционное заболевание, которое чаще всего передается половым путем, например при прямом контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром), также возможно внутриутробное заражение. Источником инфекции является больной человек. Сифилис легкоизлечим, но грозит серьезными проблемами со здоровьем при бездействии. Инфицированная мать способна передавать заболевание своему плоду, у которого могут развиться серьезные и необратимые изменения.
Различают несколько стадий сифилиса. Первичная наступает примерно через 2-3 недели после заражения. Одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, появляются, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Зачастую твердый шанкр безболезненный и может оставаться незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Исчезает язва через 4-6 недель.
Вторичный сифилис начинается через 2-8 недель после первого появления твердого шанкра. Эта стадия заболевания характеризуется появлением на коже розеолезно-папулезной сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Бывают и другие симптомы, такие как лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле. Если сифилис не лечить, он может развиваться в скрытой форме, при которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но он продолжает оставаться носителем инфекции. Эта стадия иногда длится годами.
У 15 % больных, которые не лечатся, проявляется поздний, или третичный, сифилис, который может продолжаться несколько лет и в заключение приводить к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам (нейросифилису), болезням сердца и даже к смерти.
Существует несколько методов, которые могут быть использованы для проверки на сифилис. Один из них позволяет определять антитела к T. pallidum в крови. Этот анализ наиболее чувствительный и специфический для обнаружения трепонемных антител на всех стадиях, в том числе и на ранней.
Когда происходит контакт человека с T. pallidum, его иммунная система реагирует, вырабатывая антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида антител к бледной трепонеме: IgM и IgG.
В ответ на инфицирование T. pallidum антитела IgM к T. pallidum вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются у большинства пациентов в конце второй недели заболевания и присутствуют у них в первичную и вторичную стадию. Иммуноглобулины класса G к T. pallidum в определяемых количествах появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Концентрация их нарастает и на 6-й неделе начинает преобладать над концентрацией IgM, достигая максимума, а затем сохраняется на определенном уровне в течение длительного времени.
Начиная с 4-й недели в крови нарастает количество обоих видов иммуноглобулинов, что ведет к положительному результату теста на суммарные антитела к T. Pallidum. Это позволяет использовать данное исследование для ранней диагностики инфицирования T. pallidum.
После эффективного лечения концентрация иммуноглобулинов постепенно снижается, но происходит это медленно, в отдельных случаях антитела могут обнаруживаться спустя год и более.
От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков, причем предпочтительно применять производные пенициллина. На ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее. Более длительная терапия может понадобиться для пациентов, инфицированных больше года.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
| Сроки выполнения | 1-3дня |
| Синонимы (rus) | антитела к бледной трепонеме суммарные |
| Методы | иммуно-ферментный анализ |
| Единицы измерения | Нет. Результат либо отрицательный, либо положительный. |
| Подготовка к исследованию | Исследование проводится утром, натощак. С последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов. |
| Исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала. Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур. |
|
| Тип биоматериала и способы его взятия | Забор венозной крови |
Спиралевидная бактерия Treponema pallidum относится к семейству Spirochaetaceae и имеет 4 подвида (T. pallidum pallidum, T. pallidum pertenue, T. pallidum carateum, T. pallidum endemicum), первый из которых наиболее распространен и является возбудителем сифилиса. Остальные вызывают такие заболевания, как пинта, фрамбезия, беджель.
После инфицирования организма бактерией иммунной системой начинают вырабатываться антитела, в первую очередь класса IgM . Они могут быть обнаружены у пациента к концу второй недели после заражения. В процессе реактивации инфекции выражено повышаются. Антитела класса IgG начинают вырабатываться через 3 - 4 недели, а на 6-ой они являются доминирующими. Титр данных иммуноглобулинов может сохраняться в крови на протяжении всей жизни. Суммарность антител имеет большое значение при диагностике, т. к. в острой фазе преобладают антитела класса IgM , при хроническом течении заболевания - класса IgG .
Период инкубации может достигать 3 месяцев, но в большинстве случае составляет около 20 дней. Первым симптомом является возникновение безболезненной твердой язвы, называемой шанкром, в диаметре до 3 см. Это первичный сифилис . Вторичный (через 4 - 10 недель) сопровождается увеличением лимфатических узлов , появлением сыпи , ломотой в теле и лихорадкой. Спустя 3 - 6 недель симптомы исчезают, но возможны рецидивы (в 25 % случаев).
Если не принимать меры лечения, то сифилис развивается в скрытой форме . Через 10 - 15 лет у 15 % больных начинает проявляться третичный сифилис , при котором возможно воздействие бактерии Treponema pallidum на любой орган или систему. Сифилис приводит к поражению нервной системы (нейросифилис ), сердца (кардиоваскулярный сифилис ), почек, мозга и т. д. Часто на коже формируются так называемые сифилитические гуммы.
